【微光譜應(yīng)用】Ocean HR2吸光度及分辨率測(cè)評(píng)
Ocean HR2光纖光譜儀憑借其專有的CCD陣列探測(cè)器和低雜散光光學(xué)平臺(tái)設(shè)計(jì),為從等離子體監(jiān)測(cè)到藥物分析等各種應(yīng)用提供了優(yōu)異的光譜性能。本次測(cè)試,將聚焦海洋光學(xué)HR2光纖光譜儀的吸光度線性度以及高分辨率性能。
關(guān)于Ocean HR2
海洋光學(xué)Ocean HR2高分辨率光纖光譜儀結(jié)構(gòu)緊湊,堅(jiān)固耐用,積分時(shí)間快至1μs,熱波長穩(wěn)定性——漂移小于每攝氏度0.06個(gè)像素,可在溫度變化時(shí)保證可靠的光譜性能。它涵蓋 ~190-1150 nm 內(nèi)各種波長范圍,可選狹縫尺寸,以幫助用戶控制光通量和光學(xué)分辨率。
Ocean HR2光譜儀可與海洋光學(xué)光源、附件和軟件兼容,允許用戶針對(duì)不同的應(yīng)用優(yōu)化。此外,每臺(tái)HR2海洋光學(xué)光譜儀都配有Ocean Direct,這是個(gè)功能強(qiáng)大的跨平臺(tái)軟件開發(fā)工具包,帶有應(yīng)用程序編程接口。
吸光度測(cè)量:重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品
為測(cè)試海洋光學(xué)HR2光纖光譜儀的吸光度線性度,測(cè)量了重鉻酸鉀吸光度標(biāo)準(zhǔn)品,每種樣品的濃度水平都不同。
測(cè)量吸光度實(shí)驗(yàn)包括海洋光學(xué)HR2-UV-VIS光譜儀、帶衰減器的DH-2000氘燈光源、兩根400 μm光纖,石英比色皿、Square One比色皿支架和海洋光譜儀軟件OceanView。
圖1.重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品的紫外吸光度
(濃度范圍20.27-100.95 mg/L)
圖1為使用Ocean HR2測(cè)得的紫外吸收譜,可看出Ocean HR2出色的低雜散光性能,特別是當(dāng)繪制與濃度關(guān)系時(shí),其吸光度線性度為0.9997(圖2)。
圖2.高吸光度線性度是海洋光學(xué)光譜儀HR2的一個(gè)特點(diǎn)。
藍(lán)色線為重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)量結(jié)果,基于該標(biāo)準(zhǔn)曲線,可預(yù)測(cè)該波長范圍內(nèi)1.5AU以下幾乎任何樣品的濃度。
吸光度測(cè)量:牛血清白蛋白BSA
BSA常用作生化應(yīng)用中的蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)品。下面使用與重鉻酸鉀實(shí)驗(yàn)相同的Ocean HR2光譜儀配置,在蒸餾水中測(cè)量了質(zhì)量同為503mg的30種不同濃度的BSA。
為確保獲得更佳測(cè)量結(jié)果,建議在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意以下:
測(cè)量前,將光譜儀和光源預(yù)熱30分鐘。預(yù)熱有助于光源達(dá)到熱平衡狀態(tài),避免由于光源輸出的微小變化而導(dǎo)致的測(cè)量偏差。
采樣時(shí)避免取下石英比色皿,因?yàn)檫@樣做可能會(huì)引入錯(cuò)誤。正確的做法是,在比色皿中進(jìn)行溶液稀釋,使用一次性移液管吸取每個(gè)樣品的一部分,然后在去離子水中混合,并對(duì)每個(gè)樣品重復(fù)該過程。
同時(shí),還建議避免測(cè)量中移動(dòng)光纖。
圖3. BSA樣品在 279 nm 處有強(qiáng)烈的吸收峰。
使用BSA測(cè)量的吸光度線性度結(jié)果甚至比重鉻酸鉀更好。取279 nm處的吸收峰(圖3),吸光度直至2.5AU,也能保證吸光度線線性度0.999(圖4)。這種性能使Ocean HR2成為定量其他類型的蛋白質(zhì)濃度及生物應(yīng)用,如分析血液成分和對(duì)藥物配方進(jìn)行質(zhì)量保證的理想選擇。
圖4. 近30個(gè)BSA樣品上測(cè)得的吸光度線性度高達(dá)0.999。
高分辨率的Ocean HR2:識(shí)別譜線
由于光學(xué)平臺(tái)優(yōu)化設(shè)計(jì),HR2海洋光學(xué)光譜儀的分辨率(FWHM)通常小于1nm。例如在測(cè)量汞氬燈氣體放射光源時(shí),在UV-VIS波段觀察到很多明確的尖峰(圖5)。
圖5.根據(jù)配置,可使用海洋光學(xué)光譜儀Ocean HR2實(shí)現(xiàn)亞納米級(jí)光學(xué)分辨率。
在測(cè)太陽輻照度時(shí)觀察到類似的光學(xué)分辨率性能,25μm狹縫的Ocean HR2在其光譜范圍內(nèi)檢測(cè)到光學(xué)分辨率小于1.2nm的光譜發(fā)射線(圖6)。
采樣配置包括一個(gè)連接到600μm VIS-NIR光纖的余弦校正器,該光纖被放置在反射探頭支架中,并以90°對(duì)著天空。
圖6. HR2海洋光學(xué)光譜儀在太陽輻照度測(cè)量中展示了其多功能性。
結(jié)語
從檢測(cè)等離子體和氣體中的窄發(fā)射線到確定蛋白質(zhì)的濃度,Ocean HR2 光纖光譜儀在實(shí)驗(yàn)室或生產(chǎn)線上提供科研級(jí)光譜儀性能,能夠勝任研究或系統(tǒng)集成的苛刻要求。
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