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高通量DSF快速分析熱穩(wěn)定性Tm方法在單抗NISTab中的應用
2025年02月14日 09:11
來源：英國應用光物理公司上海代表處
NISTmAb是一種廣泛表征的單克隆抗體，旨在用作開發(fā)**蛋白表征新技術(shù)中的標樣。在本應用文獻中，我們使用SUPR-DSF來獲取NISTmAb的差示掃描熒光法DSE)的教話，開洛結(jié)果與壽示掃描量熱法DSO進行比較。SUPR-DSE解折了NISTAb所有的二個結(jié)構(gòu)域：CH2(690C.CH3(830()和高解特汽度的FAB結(jié)構(gòu)域(94oC)[1]。此外，所測得的Tm值與文獻的報道一致。這些結(jié)果證明了，應用SUPR-DSF可以輕松獲得高質(zhì)量的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性信息。
結(jié)論：
Protein Stable公司的SUPR-DSF可以通過檢測蛋白質(zhì)內(nèi)源熒光的峰位移，并快速準確地測量解鏈溫度。結(jié)果表明SUPR-DSF能夠獲得準確的解鏈溫度，包括像Fab結(jié)構(gòu)域這樣的超高解鏈溫度(94 0C)。這也驗證了基于內(nèi)源熒光法的SUPR-DSF可以獲得與DSC一致的結(jié)果。利用384孔板進行測試的優(yōu)勢在于提高了通量，增加了便利性同時降低了樣品的消耗。
方法：
濃度為1mg/ml的NISTmAb在pH6的L-組氨酸緩中液中進行配制，分別加到384孔LPCR微孔板中，每個孔用量是104L。分裝后，將微孔板離心60秒后，用透明膠膜密封。將SUPR-DSF中的連續(xù)升混程序設(shè)置成以每分鐘10C的升溫速率測量150C到105oC的熒光光道，熒光光譜所獲得的數(shù)據(jù)，通過BCM方法進行計算處理，并量化光譜偏移。BCM的數(shù)據(jù)會處理成溫度的函數(shù)，并轉(zhuǎn)換成一階導數(shù)再進行分析。根據(jù)導數(shù)的峰值計算解鏈溫度。所有樣品的方法和結(jié)果均可獲取。
關(guān)鍵詞：
高通量DSF
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